中医湿证动物模型的研究进展

　　摘要：湿，属六气之一。湿证是指具有湿之特性的各种不同证候。近年来，湿证是中医证候研究的热点和重点具有重要的科学研究价值，证候的构建是中医与现代医学的桥梁和纽带。构建能客观体现及反映湿证的动物模型是进一步开展临床和基础研究的立足点。目前，已有很多的中医湿证实验室研究报道，尤其在各种中医湿证动物模型的构建及相关指标的检测。本文将综述中医湿证的理论源流、湿证动物模型分类及湿证模型检测指标及意义的研究进展进行探讨，为中医湿证动物模型的建立及优化研究提供参考及启示，以期为湿证动物模型的构建及湿证生物学机制研究提供思路。

　　关键词：中医，湿证;湿证动物;动物模型;模型;研究;研究进展

　　湿证的产生，可以外来也可内生。外来因素包括：居住卑湿及雾露雨湿等，内生因素包括多食生冷及酒酪之品。不论内湿及外湿，皆是脾气虚弱以后，湿邪乘虚而入所致。湿邪作为重要的致病因素，历代医家对其致病机制的理解亦逐步加深。目前现存最早关于湿邪致病的记载可追溯到战国时期的医籍《五十二病方》，其婴儿索痉篇中载有“索痉者，如产时居湿地久”表明生产时感受湿邪可致索痉病。

　　中医医学论文：中医针灸技术在院外急救的应用分析

　　《皇帝内经》进一步丰富了对湿邪致病的认识，其中《素问生气通天论篇第三》载“因于湿,首如裹”。湿证之治疗，《时病论》中倪松亭云：治湿之道非一，当细察而药之。湿在皮肤常见病证为脾虚湿蕴，脾虚湿蕴证即饮食不节或禀赋不耐，蕴于肌肤所表现出来的皮损，大便稀溏，舌淡，苔白，脉细滑一类病证，本病证见于蛇串疮、婴儿湿疹特应性湿疹、黧黑斑、湿疮。

　　寒湿之邪乘虚而入，阻滞经络，流注关节、肌肉，致使气血不通，不通则痛;寒湿为阴邪，故四肢疼痛、沉重、乏力。中医认为，风寒湿合而为痹，造成风湿性关节炎、类风湿关节炎等。正如《丹溪心法中湿》所载“湿之为病，有自外入者，有自内出者”，湿邪分为内湿和外湿而致病。吴鞠通《温病条辨湿》有言“脾主湿土之质，为受湿之区，故中焦湿症最多”说明内湿主要由于脾胃失司所致，外湿则由外界环境水湿之邪所致，内湿与外湿二者不能完全区分，往往相互引动而致病。

　　湿证动物模型分类及其造模方法中医湿证的理论方法及临床经验需要运用现代医学方法来进行探讨及研究，故采用合适的动物模型，尤其是建立标准化中医证候(湿证)动物模型是推动中医证候研究的重要环节。中医证候的动物模型应以中医理论为指导、构建的模型症状应符合中医临床症状、具有可重复及稳定性为基本原则。此外，也可用相应的药物干预进行反证治疗。目前，已有中医证候模型构建的文献报道，包括模型的建立方法、条件及检测指标进行了相关的研究，现将该方面的研究进展综述如下。

　　1.1内湿证动物模型

　　1.1.1脾虚湿阻模型陈浩等[1]用复合造模方法构建了脾虚湿阻型大鼠模型，具体方法为：先以高脂饲料(含30%蛋白、10%含高胆固醇的动物油脂、10%胆固醇、1%胆盐)喂养SD大鼠周，第天开始每日在饲养高脂饲料的基础上给予每只大鼠4ml冰糖水灌胃(分次，每次2ml)，每日让大鼠游泳次至耐力极限，其中冰糖灌胃共16天，游泳21天，造模时间共48天。

　　赵文晓等[25]及刘嘉琪等[6]的研究通过每日给予大鼠高脂低蛋白饲料和力竭游泳相结合的方法构建了成功的脾虚湿困大鼠模型。具体操作方法为：模型组及各药物组给予特制的高脂低蛋白饲料(AIN纯化饲料基础上减少酪蛋白含量,增加猪油和胆固醇制成),每天下午尾部以10%体质量负重游泳,入水游至力竭即鼻尖没入水中10s停止,诱导周，造模时间共周。李尧[7]用苦寒泻下联合饥饱失常方法构建了脾虚湿困大鼠模型，其具体造模方法为：每日早晚给大鼠灌胃大黄水煎液约2ml(2ml·100g·d),隔天禁食，饮水自由，造模时间共14天。

　　1.1.2脾虚水湿不化模型

　　王彦芳等[8]依据中医劳倦联合饮食伤脾理论成功构建了脾虚水湿不化大鼠模型，具体造模步骤为：每日下午将大鼠放入温度约为20℃±2℃、深约50cm的水中游泳，游泳时以10%体重尾部负重，游泳至鼻尖淹没入10s时表明大鼠已精疲力竭即停止游泳。造模期间以高脂低蛋白饲料具体成分:15%猪油，5%玉米油，0.2%氯化胆碱，15%淀粉，47.5%蔗糖，5%纤维素，7%酪蛋白，0.5%胆固醇，0.3%蛋氨酸，3.5%多矿，1%多维饲养大鼠，造模时间共周。

　　赵文晓[9]、王彦芳[10]、刘阿娜[11]、韩晓春[12]、赵宏伟[13]、崔宁[14]、李自辉等[1516]给予雄性大鼠高脂低蛋白饲料(在AI76A纯化饲料的基础上减少酪蛋白含量，增加猪油和胆固醇配制而成，成分为蔗糖47.5%，氯化胆碱0.2%，纤维素5%，蛋氨酸0.3%，酪蛋白7%，淀粉15%，玉米油5%，多矿3.5%，猪油15%，多维1%，胆固醇0.5%)喂养，每日以10%体质量进行尾部负重游泳(水温15～20℃，水深40～45cm[15,16])，大鼠鼻尖没入水中10s以上即判断为力竭，停止游泳，造模时间共周，成功构建了脾虚水湿不化模型。

　　1.1.3痰湿证

　　张春仁[17]通过喂养小鼠60%高脂饲料和30%糖水成功构建了内湿因素诱导的痰湿证小鼠模型，其造模周期为三个月。周游等[18]每日给予小鼠高脂饲料(具体配方为：50%基础饲料、10%鸡蛋、%香油、20%猪油、%奶粉、白砂糖%、花生%、盐%)食用构建了痰湿证小鼠模型，造模时间共64天。

　　喻松仁等[19]通过给予大鼠高脂饲料喂养周后成功构建了痰湿证模型，其高脂饲料是在100g基础饲料中加入全脂奶粉和猪油各15g、并加入10g蛋黄粉、0.5g猪胆盐及适量浓缩鱼肝油配制而成。姜凌宇[20]、姜月华[21]等通过给予大鼠配制好的高脂饲料亦成功构建了痰湿壅盛的大鼠模型，其高脂饲料中含有12%猪油、1%麻油、5%花生粉、10%鸡蛋、5%奶粉、5%蔗糖及2%食盐，此研究中痰湿壅盛证的大鼠模型造模时间为24周。杨海燕等[2223]的研究通过给大鼠喂养高脂饲料周成功构建了痰湿证动物模型，其所用高脂饲料含15%猪油、10%蛋黄粉、15%全脂奶粉和0.5%猪胆盐。

　　1.1.4湿热证

　　王见文等[24]通过内外因素诱导构建了脾虚湿热证小鼠模型，其具体构建方法为：以80%基础饲料、12%猪油、8%蜂蜜配制形成实验中所需的高脂高糖饲料，每日喂养小鼠以高脂饲料，连续诱导周后予小鼠以0.3mL/只的剂量H.pylori菌液灌胃，每次间隔时间为48小时，灌胃感染次后定值周，总共造模时间12周。

　　1.2外湿证动物模型

　　荣光莉等[25]等通过外湿因素诱导了小鼠湿热证模型，研究人员通过利用人工气候箱联合超声波加湿器来控制造模因素温度和相对湿度，白天12小时将温度设定为，夜间将温度设定为(33±2)℃、相对湿度设置为85%，夜间12小时将将温度设定为(20±2)℃、相对湿度设置为60%，造模时间持续14天。周欣云等[26]将小鼠每日饲养于温度设置为(21±1)℃相对湿度设置为(90±5)的高湿环境中12h并予小鼠无卵蛋白饲料喂养，其余时间将小鼠饲养在正常环境中，从第15天起每日将小鼠置于密闭容器中并用生理盐水雾化激发60分钟,造模时间共21天。

　　谢俏俏等[27]构建了寒湿证大鼠模型，具体操作方法为：每日上午12时至下午时将大鼠置于明暗周期为12h/12h的人工气候室寒湿环境饲养，人工气候室中温度设置为(4±0.5)℃、湿度设置为(90±2，其余时间在温度为18～22℃，相对湿度为50～60%的常规环境饲养，造模时间共21天。陈燕等[2829]每日给予小鼠0.1mg/kg皮下注射利血平，连续诱导14天后构建了外湿因素诱导的脾虚证模型。赖鹏华等[30]将小鼠放置于温度设置为(33±0.5)℃、相对湿度设置为(95±5)%的人工气候箱中天构建了湿热证小鼠模型。

　　2湿证模型检测指标及其意义

　　随着现代科技的发展，对于模型的构建及评价也越来越多采用现代生物学指标包括蛋白、基因等水平上的评价。使模型的构建更加客观化、指标化及标准化，促进中医证候模型的发展。目前已有多个指标能反映动物模型的部分特征，判定模型是否准确及成功。相关的检测指标包括：细胞因子及相关蛋白等。

　　3小结

　　目前湿证动物模型多采用Balb、C57BL/6小鼠和Wister大鼠等不同品系作为主要的研究动物，造模方法大体可分为外湿因素、内湿因素以及内外湿因素联合应用造模。对于外湿因素多数研究采用人工气候箱模拟外湿环境，从文献综述可知其温度、相对湿度及放置时间的条件差异较大。对于内湿因素而言，多数研究采用改变模型动物饮食结构来构建内湿证模型，如通过提供自行配制或定制的高脂高糖或高蛋白饲料、含糖或含蜂蜜的饮用水饲养而构建内湿证模型，不同条件方法差异较大。笔者认为基于临床中医证候本身的复杂性内外湿因素综合造模是比较合适的湿证动物模型，具体的实验条件还需进一步的实验验证。

　　4讨论

　　湿证动物模型因涉及多因素，多指标及指标检测可重复性较差，其次各个造模因素如外湿因素温度、相对湿度、诱导时间、内湿造模因素饲料的具体配比等无统一标准，后期研究应在前人研究的基础上通过进一步实验摸索，比较各指标、条件差异结合临床症状予以确定。

　　现阶段中医证候动物模型尚未成熟，需要不断完善。而且湿证动物模型并无规范统一的评价标准，从上述研究各项检测指标可以发现湿邪致病几乎涉及人体所有系统，这与湿邪致病范围广的致病特点相符，正如书中所载“夫湿乃重浊之邪,其伤人最广”(陆子贤《六因条辨》)，今后应不断探索在前期工作基础上进一步深入研究探索出规范的造模条件以及能客观反映湿证的特异性生物学指标，以期能够服务于临床，为证候诊断以及临床中治疗方法的评价提供参考。

　　参考文献

　　[1]陈浩,刘志勇,侯吉华等.脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型建立及客观性评价[J].江西中医药大学学报,2019,31(06):8486+112.

　　[2]赵文晓,季旭明,王媛等.黄芪多糖对脾虚湿困大鼠内分泌、免疫相关因子的影响[J].世界中医药,2020,15(03):385387+391.

　　[3]赵文晓,李军山,张亚楠等.黄芪多糖对脾虚水湿不化模型大鼠抗疲劳能力的影响[J].时珍国医国药,2019,30(06):13201321.

　　[4]赵文晓,于镇玮,崔宁等.黄芪多糖对脾虚水湿不化模型大鼠血清GAS、CCK、VIP及尿木糖排泄率的影响[J].山东中医杂志,2019,38(06):573576.

　　[5]赵文晓,崔宁,季旭明等.黄芪及其拆分组分对脾虚水湿不化大鼠矿物质吸收相关基因表达谱的影响[J].中华中医药杂志,2017,32(11):50645067.

　　[6]刘嘉琪,王秋红,匡海学.防己与茯苓配伍对脾虚水湿不化模型大鼠的影响[J].中华中医药杂志,2017,32(10):44004403.

　　作者：吴清，莫秀梅，陈达灿，晏烽根